ⅠNاسید اوکلئیکiمقدمه
اسید نوکلئیک به دو دسته دئوکسی ریبونوکلئیک اسید (DNA) و اسید ریبونوکلئیک (RNA) تقسیم می شود که از بین آنها RNA با توجه به عملکردهای مختلف به RNA ریبوزومی (rRNA)، RNA پیام رسان (mRNA) و RNA انتقالی (tRNA) تقسیم می شود.DNA عمدتاً در هسته، میتوکندری و کلروفرم متمرکز است، در حالی که RNA عمدتاً در سیتوپلاسم توزیع می شود.به عنوان پایه مادی بیان ژن، استخراج اسید نوکلئیک نقش بسیار مهمی در تحقیقات زیست شناسی مولکولی و تشخیص مولکولی بالینی ایفا می کند.غلظت و خلوص استخراج اسید نوکلئیک مستقیماً بر PCR بعدی، تعیین توالی، ساخت وکتور، هضم آنزیم و سایر آزمایش‌ها تأثیر می‌گذارد.
Ⅱ روش استخراج و خالص سازی اسید نوکلئیک
① روش استخراج فنل/کلروفرم
استخراج فنل/کلروفرم یک روش کلاسیک برای استخراج DNA است که عمدتاً از دو حلال آلی مختلف برای تصفیه نمونه ها استفاده می کند، اسید نوکلئیک مبتنی بر DNA را در فاز آب، لیپیدها در فاز آلی و پروتئین ها را بین دو فاز حل می کند.این روش دارای مزایای کم هزینه، خلوص بالا و اثر خوب است.معایب عملیات پیچیده و طولانی مدت است.
② روش تریزول
روش تریزول یک روش کلاسیک برای استخراج RNA است.روش تریزول پس از سانتریفیوژ با کلروفرم به فاز آبی و فاز آلی تقسیم می شود که در آن RNA در فاز آبی حل می شود، فاز آبی به لوله EP جدید منتقل می شود، پس از افزودن ایزوپروپانول، رسوب حاصل می شود و سپس خالص سازی اتانول انجام می شود.این روش برای استخراج RNA از بافت ها، سلول ها و باکتری های حیوانی مناسب است.
③ روش تصفیه ستون گریز از مرکز
روش خالص سازی ستون سانتریفیوژ می تواند DNA را به طور خاص از طریق مواد جذب ماتریس سیلیکونی خاص جذب کند، در حالی که RNA و پروتئین می توانند به آرامی عبور کنند و سپس از نمک بالا با PH کم برای ترکیب اسید نوکلئیک، نمک کم شستشو با PH بالا برای جداسازی و خالص سازی اسید نوکلئیک استفاده کنند.از مزایای آن می توان به غلظت تصفیه بالا، پایداری بالا، عدم نیاز به حلال آلی و هزینه کم اشاره کرد.نقطه ضعف آن این است که باید مرحله به مرحله سانتریفیوژ شود، مراحل عملیات بیشتری.
④ روش دانه های مغناطیسی
روش دانه‌های مغناطیسی به این صورت است که نمونه بافت سلولی را از طریق لیز جدا می‌کنند، اسید نوکلئیک را در نمونه آزاد می‌کنند و سپس مولکول‌های اسید نوکلئیک به طور خاص روی سطح مهره مغناطیسی جذب می‌شوند، در حالی که ناخالصی‌هایی مانند پروتئین‌ها و قندها در آن باقی می‌مانند. مایعاز طریق مراحل تقسیم بافت سلولی، اتصال مهره مغناطیسی با اسید نوکلئیک، شستشوی اسید نوکلئیک، شستشوی اسید نوکلئیک و غیره، در نهایت اسید نوکلئیک خالص به دست می آید.مزایا عملیات ساده و استفاده کوتاه مدت، بدون نیاز به سانتریفیوژ مرحله ای است.الزامات فنی پایینی دارد و می تواند عملیات اتوماتیک و انبوه را انجام دهد.ترکیب خاص مهره مغناطیسی و اسید نوکلئیک باعث می شود اسید نوکلئیک استخراج شده با غلظت و خلوص بالا باشد.نقطه ضعف آن این است که قیمت فعلی بازار نسبتاً گران است.
⑤ روش های دیگر
علاوه بر چهار روش فوق، کراکینگ جوشان، روش نمک غلیظ، روش شوینده آنیونی، روش اولتراسونیک و روش آنزیمی و ... می باشد.
Ⅲ نوع استخراج اسید نوکلئیک
Foregene دارای پلت فرم مستقیم PCR مستقیم، پلت فرم جداسازی RNA دو ستونی (فقط DNA + RNA) است.محصولات اصلی شامل کیت های جداسازی DNA/RNA، سری واکنشگرهای آزمایشگاهی مولکولی PCR و Direct PCR می باشد.
① استخراج RNA کل
نمونه های استخراج RNA کل شامل خون، سلول ها، بافت های حیوانی، گیاهان، ویروس ها و غیره می باشد. خلوص بالا و غلظت بالای RNA کل را می توان از طریق استخراج RNA کل بدست آورد که می توان از آن در RT-PCR، تجزیه و تحلیل تراشه، ترجمه آزمایشگاهی، استفاده کرد. شبیه سازی مولکولی، دات بلات و آزمایش های دیگر.
مربوط به Foregeneکیت های جداسازی RNA
کیت جداسازی RNA توتال حیوانات--استخراج سریع و کارآمد RNA کل با خلوص بالا و با کیفیت بالا از بافت های مختلف حیوانات.
کیت جداسازی RNA توتال سلولی--RNA کل بسیار خالص و با کیفیت بالا را می توان از سلول های کشت شده مختلف در 11 دقیقه به دست آورد.
کیت جداسازی RNA توتال گیاهی--به سرعت RNA کل با کیفیت بالا را از نمونه های گیاهی با محتوای پلی ساکارید و پلی فنل کم استخراج کنید.
کیت جداسازی RNA ویروسی- به سرعت RNA ویروسی را از نمونه هایی مانند پلاسما، سرم، مایعات بدن بدون سلول و رویی کشت سلولی جدا و خالص کنید.
② استخراج DNA ژنومی
نمونه های استخراج DNA ژنومی شامل خاک، مدفوع، خون، سلول ها، بافت های حیوانی، گیاهان، ویروس ها و غیره می باشد. استخراج DNA ژنومی را می توان در هضم آنزیمی، ساخت کتابخانه DNA، PCR، آماده سازی آنتی بادی، آنالیز هیبریداسیون وسترن بلات، تراشه ژن، بالا استفاده کرد. توالی یابی توان عملیاتی و آزمایشات دیگر
مربوط به Foregeneکیت های جداسازی DNA
کیت جداسازی DNA بافت حیوانی- استخراج و خالص سازی سریع DNA ژنومی از منابع متعدد مانند بافت های حیوانی، سلول ها و غیره.
کیت میدی DNA خون (1-5 میلی لیتر)-تصفیه سریع DNA ژنومی با کیفیت بالا از خون ضد انعقاد (1 تا 5 میلی لیتر).
کیت جداسازی DNA کارت سواب باکال/FTA-تصفیه سریع DNA ژنومی با کیفیت بالا از نمونه های سواب باکال/کارت FTA.
کیت جداسازی DNA گیاهی-تصفیه سریع و بدست آوردن DNA ژنومی با کیفیت بالا از نمونه های گیاهی (شامل پلی ساکاریدها و نمونه های گیاهی پلی فنل)
③ استخراج پلاسمید
پلاسمید نوعی DNA مولکول کوچک دایره‌ای در سلول‌ها است که حامل معمولی برای نوترکیبی DNA است.روش استخراج پلاسمید، حذف RNA، جداسازی پلاسمید از DNA ژنومی باکتری و حذف پروتئین و سایر ناخالصی ها برای به دست آوردن پلاسمید نسبتاً خالص است.
کیت مینی پلاسمید جنرال-تصفیه سریع DNA پلاسمید با کیفیت بالا از باکتری های تبدیل شده برای آزمایش های معمول زیست شناسی مولکولی مانند تبدیل و هضم آنزیمی
④ انواع دیگر استخراج، استخراج miRNA و غیره.
کیت جداسازی miRNA حیوانات- استخراج سریع و کارآمد قطعات RNA کوچک miRNA، siRNA، snRNA 20-200 nt از بافت ها و سلول های حیوانی
Ⅳ الزامات برای استخراج و خالص سازی اسید نوکلئیکs
① برای اطمینان از یکپارچگی ساختار اولیه اسید نوکلئیک.
② کاهش تداخل پروتئین ها، قندها، لیپیدها و سایر ماکرومولکول ها
③ هیچ حلال آلی یا غلظت بالایی از یون های فلزی نباید وجود داشته باشد که بتواند آنزیم را در نمونه های اسید نوکلئیک مهار کند.
④ RNA و سایر آلودگی های اسید نوکلئیک باید هنگام استخراج DNA از بین بروند و بالعکس.
زمان ارسال: نوامبر-24-2022
